食品機械設備網技術文章
糖化酶的液態發酵生產-糖化酶的發酵
閱讀：389 發布時間：2022-11-18糖化酶的液態發酵生產
、能力目標
①借助相關材料，能完成糖化酶制劑的液態發酵過程的操作。
②理解酶制劑超濾濃縮的原理，并能立完成其操作步驟。
③理解無機鹽沉淀和有機溶劑沉淀法提取酶的原理，能立操作其過程。
二、生產工藝流程
糖化酶的液態發酵生產工藝流程如圖6-16所示。
斜面培養—獲皮種子——上濾熔養——板抵過法—超濾依——沉淀——泥干燥圖6-16糖化酶的液態發酵生產工藝流程
三、實訓材料
1.菌種
黑曲霉UV-11.
2.培養麩
（1）斜面培養基
土豆培養基。
（2）獲皮種子培養基
小麥麩皮與水的比例為1：（1.1~1.3），接種后于30~32℃培養4~5d至長滿豐富的孢子，中間翻曲。
（3）發酵培養基
玉米粉13.5%，豆餅粉3.5%，麩皮1.0%，玉米漿2.0%，無機鹽。
3.實驗儀器與設備
滅菌鍋、試管、棉塞、培養基原料、培養箱、500mL三角瓶。
251.全自動發酵熊、恒溫培養箱、板框壓濾機、膜過濾裝置。
四、操作要點
1.種子剖備
固體孢子培養：將10g麩皮和10ml.水拌勻后滅菌30min，冷卻后接入環斜面菌種，于30~32℃培養4~5d至長滿豐富的孢子備用，種子罐培養：玉米粉6%，黃豆餅粉2%，麩皮2%。在31℃下通風培養32h，通氣比為0.5：1，當pH下降到3.8，酶活力在500U/mL左右，鏡檢菌絲生長正常且無雜菌污染時，即可接入二種子罐或發酵罐。
2.251.維發酵
按配方配制培養基（裝液量15l），調pH至4.0，加入發酵罐中，121℃滅落30min，冷卻，待溫度降至30~32℃，接人個三角瓶的孢子懸液或種子罐培養的種子，在30℃、罐壓0.05MPa下攪拌培養，攪拌速度為500r/min。通氣比：0~12h為0.5：1；12~24
h為0.8：1；24~84h為1.0：1；84h后為0.8：1。
3.發酵過程監控
每隔12h取樣測定酶活力、pH、還原糖及總糖濃度并作鏡檢。當pH降至3.4，還原糖降至1.8%以下，醇活力上升至13600I/ml.以上時，即可放錯。
4.發酵液過泌
洗凈板框壓濾機，裝好濾布，接好板框壓濾機的管道，泵料過濾，加水洗滌，空氣吹干，過濾結束后洗凈過濾機及有關設備。取濾液體積，取樣測定糖化酶活力。
5.超濾濃館
取10L糖化酶的濾液加人到超濾裝置的儲罐中，開動循環料液泵進行超濾，控制超濾壓力小于0.4MPa。每隔20min用量筒測量透過液流量，比較透過液流量的變化。
當濃縮倍數達到3~5倍時，停止超濾。
測濃縮液體積，原酶液、濃縮液和透過液的酶活力。
6.有機溶刻沉淀
取1L濃縮液，用鹽酸調節pH至3.5.在10~~20℃條件下加入3.5倍冷凍的*，邊加邊攪拌，即可發現酶的沉淀現象。沉淀物用布氏漏斗抽濾。稱量酶泥的質量，測定酶活力，
7.無機鹽沉淀
取1l.濃縮液，按55g/（100ml.）加硫酸銨，靜止鹽析1h。沉淀物用布氏漏斗抽濾。
稱酶泥的質量，測定酶活力。
8.酶泥的干燥
將上述步驟中得到的酶泥放入干燥箱中，在40℃下以熱風干燥，將干燥的制品磨粉即得成品。將成品稱量并測定酶活力。
五、過程檢驗及成品酶活力測定
1.黑曲霉鍵檢
（1）染料
草酸銨結品紫液（A液：1%結晶紫加95%酒精溶液；B液：1%草酸銨溶液，取A液20mL，B液80mL混合，靜置48h后使用）。
（2）鏡檢過程
涂片→干燥→固定→染色水洗干燥→鏡檢。
2.總糖的測定
要林法測定發酵液中的總糖。
3.還原糖的測定
DNS法，參考本書相關內容：
4.樹化酶酶活力的測定
參考本書相關內容。
5.pH、溶解氧的跟蹤測定
從二次儀表直接讀取。
六、實訓報告
寫出書面實訓報告，并著重分析過程中出現的問題以及解決的辦法。
七、實訓思考題
1.還原糖的測定除了DNS法還有什么方法？
2.糖化酶固態發酵與液態發酵的異同有哪些？
模塊七
新型發酵技術
項目1固定化細胞生產技術