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生產車間階段種子制備流程
閱讀:504 發布時間:2022-11-17生產車間階段種子制備流程
實驗室制備的孢子或搖瓶菌絲體移到種子罐進行擴大培養,對于不同的菌種,種子罐培養基雖各有不同,但配制原則是基本相同的。
好氧種子進罐培養時需要供給足夠的無菌空氣并不斷攪拌,使每部分菌絲體在培養過程中獲得相同的培養條件,均勻地獲得溶解氧。孢子懸浮液般采用微孔接種法接種。搖瓶菌絲體種子可采用火焰接種或壓差法接種。種子罐之間或發酵罐之間的移種主要采用壓差法,由種子接種管道進行移種,操作過程中要防止接受罐的表壓降到零,否則會染菌。
生產車間制備種子時應考慮三點:種子罐數、種齡、接種種子罐數是制備種子需逐擴大培養的次數。種子罐數通常是根據菌種生長特性、孢子發芽速率、菌體繁殖速率以及發酵的容積而設定的。對于生長較慢的鏈霉菌,般采用三發酸(二種子罐擴大培養)、四發酵(三種子罐擴大培養)。對于生長快的細菌,種子用量比較少,接種的數相應也少,般采用二發酵(擴大培養)。種子罐的數少有利于簡化工藝,并可減少由于多次移種而產生的染菌幾率。在實際生產中,應該考慮盡量延長發酵時間(如生產產物的時間),縮短由于種子發芽、生長而占用的時間,以提高發酵生產效率,從而降低生產成本。
種齡是指種子罐中培養的菌絲體開始移入下種子罐或發酵罐時的培養時間。在種子罐中,隨著培養時間的延長,菌絲量增加,營養基質逐漸消耗,代謝產物不斷積累,導致后菌絲量不再增加而逐漸趨于老化,因此選擇適當的種齡顯得十分重要。通常種齡以菌絲處于生命力為旺盛的對數生長期,培養液中菌體量還未達到時為宜。若過于年輕的種子接入發酵罐,往往會出現前期生長緩慢,整個發酵周期延長,產物開始形成的時間推遲,甚至會因菌絲量過少而在發酵罐內結球,造成發酵異常的情況。
接種量是指移入的種子液體積與接種后培養液總體積的比例。接種量的大小取決于生產菌種在發酵罐中生長繁殖的速率和產品生產的工藝要求。較適宜的接種量可以縮短發酵罐中菌絲繁殖到達的時間,使其在生產中迅速占據整個培養環境,減少雜菌生長機會,同時也縮短了產品生成時間。相反,接種量過多,使菌絲生長過快,培養液黏度增加,造成溶解氧不足而影響產物的合成。總之,對每個生產菌種,要進行多次試驗后才能決定適接種量。